Вакцина для профилактики гепатита А культуральная очищенная концентрированная адсорбированная инактивированная жидкая ФС.3.3.1.0029.15

Государственная фармакопея 13 издание (ГФ XIII)

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

ФС.3.3.1.0029.15 Вакцина для профилактики гепатита А  инактивированная жидкая

Взамен ВФС 42-2743-96

Настоящая фармакопейная статья распространяется на вакцину для профилактики гепатита А культуральную, очищенную концентрированную адсорбированную инактивированную жидкую, предназначенную для профилактики гепатита А, которая представляет собой суспензию инактивированных вирионов вируса гепатита А (ВГА), выращенных на разрешенной для производства вакцин культуре перевиваемых клеток, очищенных, концентрированных и адсорбированных на геле алюминия гидроксида.

Готовую форму вакцины выпускают в жидком виде в ампулах для внутримышечного введения.

Препарат предназначен для профилактики вирусного гепатита А у взрослых (доза 1 мл) и детей (доза 0,5 мл).

ПРОИЗВОДСТВО

Для производства вакцины против гепатита А используют штамм вируса гепатита А (ВГА), адаптированный к перевиваемой культуре клеток. Производственный штамм вируса является исходным для приготовления посевного вируса. Его хранят в ампулах при температуре минус (20 ± 2) °С с ежегодной проверкой инфекционного титра и антигенной активности.

Производственный штамм должен быть депонирован.

Производственный штамм контролируется не реже 1 раза в год.

Посевной вирус получают путем заражения производственным штаммом перевиваемой культуры клеток. Посевным вирусом может служить сбор 1-го и 2-го пассажа производственного штамма в указанной выше культуре. Сбор вируса осуществляют на 21 сут инкубации зараженной культуры клеток при температуре (37 ± 2) °С. Зараженные клетки собирают в 0,01 М фосфатно-солевом буферном растворе, рН (7,6 ± 0,2), пятикратно замораживают при температуре минус (20 ± 2) °С, оттаивают при температуре (18 ± 2) °С.

Посевной вирус должен быть свободным от контаминации бактериями (в том числе микоплазмами), грибами и посторонними вирусами; должен обладать антигенной специфичностью и репродуктивной активностью. Инфекционный титр вируса должен быть не ниже 10^5,5 ТЦД₅₀/мл при заражении перевиваемой культуры клеток. Посевной вирус хранят при температуре не выше минус (20 ± 2) ⁰С с ежегодным контролем его инфекционного титра.

Состав на 1 мл (1 прививочная доза для взрослых), если нет других указаний в нормативной документации:

• инактивированный антиген вируса гепатита А – не менее 320 ИФА единиц;
• алюминия гидроксид – от 0,35 до 0,65 мг;
• формальдегид – не более 0,15 мг;
• 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор – до 1 мл.

Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков.

Состав на 0,5 мл (1 прививочная доза для детей), если нет других указаний в нормативной документации:

• инактивированный антиген вируса гепатита А – не менее 160 ИФА единиц;
• алюминия гидроксид – от 0,17 до 0,32 мг;
• формальдегид – не более 0,07 мг;
• 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор – до 0,5 мл.

Вакцина не содержит консервантов и антибиотиков.

ИСПЫТАНИЯ

Описание. Слегка опалесцирующая суспензия, при отстаивании разделяющаяся на 2 слоя: верхний – прозрачная, бесцветная жидкость; нижний – осадок белого цвета, легко разбивающийся при встряхивании, без образования хлопьев и посторонних включений.

Подлинность. Препарат должен быть идентичным антигену вируса гепатита А и должен индуцировать у мышей образование антител к вирусу гепатита А (ВГА), наличие которых определяют в соответствии с ОФС «Метод иммуноферментного анализа» с помощью коммерческих тест-систем для выявления антител к вирусу гепатита А.

Извлекаемый объем. Не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС «Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения».

Размер частиц. Суспензия должна свободно проходить в шприц через иглу № 0840. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

Время седиментационной устойчивости. Суспензия, образующаяся при встряхивании, не должна расслаиваться в течение не менее 5 мин. Определение проводят визуально в соответствии с ОФС «Лекарственные формы для парентерального применения».

pH. От 7,0 до 7,6. Испытания проводятся потенциометрическим методом в соответствии с ОФС «Ионометрия».

Стерильность. Препарат должен быть стерилен. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Стерильность».

Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Пирогенность».

Аномальная токсичность. Препарат должен быть нетоксичным. Испытания проводят в соответствии с ОФС «Аномальная токсичность».

Специфическая активность. Испытания проводят путем определения содержания вирусного антигена гепатита А методом иммуноферментного анализа (ИФА) или по иммуногенной активности вакцины биологическим методом.

Определение содержания вирусного антигена гепатита А (АГ ВГА) Содержание вирусного антигена должно быть не менее 320 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для взрослых и не менее 160 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для детей; определение проводят методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем для выявления антигена ВГА. Определение содержания антигена ВГА в вакцине проводят параллельно с определением содержания антигена в стандартном образце (СО) вакцины. Отношение содержания АГ ВГА в 1 дозе вакцины к содержанию АГ ВГА в СО должно находиться в пределах от 0,66 до 1,66 при статистической обработке результатов методом параллельных линий. Постановку контроля осуществляют в соответствии с инструкцией по применению используемой тест-системы.

Перед постановкой ИФА проводят предварительную десорбцию АГ ВГА с алюминием гидроксида, центрифугируя 1000 мкл испытуемого образца вакцины и СО при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре.

Из 900 мкл надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1:4 и осуществляют постановку ИФА с определением титра АГ ВГА в надосадочной жидкости (расчет N₁).

Осадок растворяют в 900 мкл буферного раствора для десорбции, тщательно перемешивают и оставляют на ночь при температуре от 2 до 8 °С. Затем центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Из надосадочной жидкости готовят ряд последовательных двукратных разведений от 1:2 до 1: 64 и определяют титр АГ ВГА методом ИФА (расчет N₂).

Расчет N₁ и N₂ осуществляют по формуле:

N=(Т * V₁) V₂,

где N – расчетное количество ИФА единиц в 1 мл готовой формы вакцины;

Т – обратная величина титра антигена ВГА в ИФА;

V₁ – объем 1 дозы вакцины, мкл;

V₂ – объем исследуемого образца в ИФА, мкл.

Суммарное содержание антигена ВГА в вакцине (N₁ и N₂) должно быть не менее 320 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для взрослых и не менее 160 ИФА единиц в 1 дозе вакцины для детей.

Примечание.

Приготовление буферного раствора для десорбции. В градуированную посуду вместимостью 50 мл помещают 50 мг желатина, 7,16 г натрия фосфорнокислого двузамещенного, 55 мг трилона Б (ЭДТА), 50 мкл твина-20 и растворяют в 40 мл воды очищенной, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при комнатной температуре не более 1 мес.

Определение иммуногенной активности ВГА

Вакцина должна индуцировать образование антител к вирусу гепатита А у однократно иммунизированных белых нелинейных мышей (самцов) массой 18 20 г. Определение содержания антител к ВГА в сыворотке крови мышей проводят методом ИФА с определением ИД₅₀, которая должна составлять не менее 6. В качестве образца сравнения используют СО вакцины. Отношение ИД₅₀ в испытуемой вакцине к ИД₅₀ в СО должно находиться в пределах от 0,33 до 3 (P = 0,95) при статистической обработке результатов методом параллельных линий.

Метод основан на определении дозы вакцины, способной вызвать образование антител к вирусу гепатита А у 50 % мышей.

Для проведения теста готовят серию разведений испытуемого образца и СО вакцины от 1: 2 до 1: 32. Для разведения используют плацебо, в состав которого входит 0,01 М фосфатно-солевой буферный раствор ( рН 7,0 –7,6 ) и гель алюминия гидроксида в концентрации от 0,35 до 0,65 мг/мл (по А1⁺³⁾. Методом случайной выборки формируют опытные и контрольную группы по 10 мышей в каждой. Дополнительно 10 мышей оставляют интактными. Количество опытных групп должно соответствовать количеству используемых разведений.

Мышам опытных групп вводят разведения вакцины в объеме 1 мл подкожно в 2 точки, используя 1 разведение препарата на 1 опытную группу. Мышам контрольной группы по той же схеме и тем же способом вводят плацебо.

Через 28 – 30 дней животных обескровливают и готовят сыворотку. Каждый полученный образец сыворотки тестируют на наличие антител к вирусу гепатита А, используя коммерческие иммуноферментные тест-системы для выявления антител к вирусу гепатита А. Постановку и учет результатов осуществляют в соответствии с инструкцией по применению тест-системы.

Результаты контроля учитывают, если все образцы сывороток интактных и контрольной групп мышей идентифицированы как отрицательные. В этом случае расчет ИД₅₀ осуществляют по результатам, полученным в опытных группах, по методу Кербера в соответствии с формулой:

lg ИД₅₀ = lg D_n – δ (Σ Li – 0,5),

где D_n – максимальная величина вводимой дозы;

lg D_n – десятичный логарифм отношения каждой последующей дозы к предыдущей (десятичный логарифм кратности испытанных разведений);

Li – отношение числа иммунных животных к числу всех вакцинированных животных конкретными разведениями;

Σ Li – сумма всех значений L.

ИД₅₀ = аntilg (–lg ИД₅₀),

где ИД₅₀ разведение вакцины, вызывающее выработку антител у 50 % животных.

Полнота сорбции антигена. Количество несвязанного антигена ВГА в вакцине должно быть не более 6 % от общего количества антигена ВГА. Образец вакцины (1000 мкл) и СО центрифугируют при 6000 об/мин в течение 5 мин при комнатной температуре. Содержание несвязанного антигена определяют в надосадочной жидкости методом ИФА с использованием коммерческих тест-систем для определения антигена ВГА в соответствии с инструкцией по применению и выражают в процентах от общего количества антигена ВГА.

Формальдегид. Не более 0,15 мг/мл. Определение проводят в соответствии с ОФС «Количественное определение формальдегида в иммунобиологических лекарственных препаратах».

Алюминия гидроксид. От 0,35 до 0,65 мг/мл (в пересчёте на А1⁺³). Испытания проводят в соответствии с ОФС «Определение ионов алюминия в сорбированных биологических лекарственных препаратах».

Упаковка и маркировка. В соответствии с ОФС «Иммунобиологические лекарственные препараты».

Дополнительная информация: указывается состав на 1 мл (1 прививочная доза для взрослых).

Наносятся предупредительные надписи: «Перед употреблением встряхивать», «Хранить в не доступном для детей месте», «Для лечебно-профилактических и санитарно-профилактических учреждений», «Не замораживать».

Транспортирование и хранение. При температуре от 2 до 8 °С. Не замораживать.