Производные фенотиазина. Количественное определение

Производные фенотиазина. Количественное определение

Производные фенотиазина. Количественное определение
Количественное определение производных фенотиазина проводится без предварительной хроматографической очистки и разделения только в случае, когда установлено отсутствие в биообъекте других веществ основного характера. При их наличии для количественного определения производных фенотиазина проводят хроматографическую очистку методом ТСХ.

Для этого на хроматографическую пластинку на стартовую линию, наносят в виде сплошной полосы шириной 1 см всю аликвоту экстракта для количественного определения к хроматографируют в системе 2. По окончании хроматографирования в УФ-свете отмечают зону соединения с соответствующим Rf, параллельно метчикам, снимают слой сорбента, содержащего соединение скальпелем в пробирку.

Элюирование проводят 10 мл раствора 25% аммиака в этаноле (1:1) элюат отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр № 4, упаривают досуха в токе холодного воздуха. Сухой остаток растворяют в 5 мл 0,1 М. раствора HCl, затем добавляют 4 мл 0,01 М. НCl.

В случае отсутствия других веществ основного характера вторую часть гептанового извлечения (кровь, моча) реэкстрагируют 5 мл 0,1 М. HCl, а затем 4 мл 0,01 М. НCl. Солянокислые растворы объединяют.

К объединенному солянокислому раствору добавляют 12 мл ацетатного буферного раствора (рН 3,5), 2 мл насыщенного раствора метилоранжа и 5 мл хлороформа. Полученная смесь взбалтывается в делительной воронке – при наличии производных фенотиазина хлороформный слой окрашивается в желтый цвет (гелиантаты производных фенотиазина, извлекаемые хлороформом).

Хлороформный слой отделяется и определяется оптическая плотность окрашенного раствора (фотоэлектроколориметр ФЭК-56 и др., кювета 10 мм, светофильтр синий с максимумом пропускания при 400 нм).

Для построения калибровочной кривой готовят стандартные растворы в 0,01 М. НСl производных фенотиазина с содержанием 1,2-10 мкг/мл производных: фенотиазина и исследуют их вышеприведенной процедурой. На основании результатов определения оптической плотности строится калибровочный график. Вышеприведенным методом изолируется до 60% производных фенотиазина из крови и до 80% из мочи.

ГХ-анализ
Разделение производных фенотиазина проводят на фазе средней полярности OV-225 (3-5% на хроматоне), в стеклянных микроколонках длиной 1-2 м при 200-250оС. Температура инжектора 250-300оС. Детектор азотнофосфорный (чувствительность 0,006 мкг/мкл), а для хлорсодержащих – по захвату электронов (чувствительность – 0,001). Внутренний стандарт — имизин.

Производные фенотиазина. Фотометрия в видимой области спектра

В основу этих методов положено измерение поглощения окрашенных продуктов реакции производных фенотиазина:

  • с конц. H2SO4 – эта методика нашла наиболее широкое применение. Недостаток метода – возможность обугливания при наличии соэкстрактивных веществ, особенно при использовании гнилостно-разложившегося биологического материала (аминазин, дипразин);
  • с реактивом Манделина и конц. H2SO4. Методика используется для производных фенотиазина, которые с конц. H2SO4 дают нестабильное окрашивание с невоспроизводимыми значениями оптической плотности (тиоридазин, левомепромазин);
  • с 18% р-ром кислоты соляной и 1 м р-ром кислоты мышьяковой.Реакция не уступает по чувствительности первым двум методам, однако мягкие условия окисления исключают возможность обугливания соэкстрактивных веществ (тиоридазин, френолон).

Производные фенотиазина. Фотометрия в УФ-области спектра
Этот метод требует высокой степени очистки извлечения и обычно сочетается с ТСХ. Измерение проводят при λмах 250-255нм в раствора 0,5 М. H2SO4.

Из биологического материала производные фенотиазина (соединения основного характера) выделяют этиловым спиртом, подкисленным 10%-м спиртовым раствором кислоты  щавелевой (рН=2-3), очищают жидкость-жидкостной экстракцией. Анализ проводится, как и в случае 1,4-бензодиазепинов, – деструкция при 100-120 0С в течение 30-60 мин в среде 6 М. HCl, затем — экстракция в органический растворитель или метод Стаса-Отто.

Производные фенотиазина. Изолирование из мочи и крови
Раздельно 5-10 мл мочи и 2 мл крови подщелачивают 50% раствором едкого натра до рН 13 и смесь кипятят в течение 10 минут на водяной бане. Полученный гидролизат охлаждается до комнатной температуры и дважды (по 20 мл) извлекается н-гептаном, содержащим 3% изоамилового спирта.

Гептановые извлечения из мочи объединяют, промывают водой, насыщенной гептаном и делят на две равные части. В одной части проводится обнаружение производных фенотиазина методом тонкослойной хроматографии в системах 3 и 4, а в другой – количественное определение. Экстракт из крови полностью расходуется на количественное определение, т.к. содержит меньшее количество соэкстрактивных веществ.

Производные фенотиазина. Хроматографичесткая очистка и обнаружение в тонких слоях
Из аликвоты органического экстракта удаляют в токе теплого воздуха органический растворитель. Сухой остаток растворяют в 0,2-0,5 мл хлороформа и полученный раствор поровну наносят на две пластинки «Силуфол». В качестве метчиков наносят аминазин (обязательно) и те производные фенотиазина, которые были обнаружены в процессе предварительного исследования. Хроматографирование проводят в системе 1 и 2.

Длина пробега – 10 см. Одну пластинку опрыскивают раствором конц. H2SO4 в этаноле (1:9) и при положительном результате на второй пластинке обнаружение проводят прокапыванием реактивом Марки.

 Таблица 6. Величины и окраски пятен производных фенотиазина

Соединение

Детекция

Системы растворителей

конц. H2SO4 в этаноле (1:9)

реактив Марки

1         

2

Rst     

Rst

Аминазин

Дипразин

Динезин

Пропазин

Левомепромазин

Мажептил

Мепазил

Трифтазин

Этаперазин

Френолон

темно-красное

темно-красное

красное

красное

голубое

красное

красное

красное

темно-красное

красное

темно-красное

темно-красное

красное

красное

голубое

красное

красное

красное

темно-красное

красное

1,00

0,74

2,10

1,29

1,56

0,08

1,47

0,48

0,34

1,71

1,00

2,95

2,95

1,08

1,87

0,13

1,60

0,26

0,48

3,21

Система 1: бензол-диоксан-25% аммиак – (60:35:5)

Система 2: этилацетат-ацетон-25% аммиак в этаноле (1:1) – (50:45:5)

Категории
Рекомендации
Подсказка
Нажмите Ctrl + F, чтобы найти фразу в тексте
Партнеры
А знаете ли вы, что нажав сочетание клавиш Ctrl+F - можно воспользоваться поиском по сайту?
X
Copyrights © 2015: FARMF.RU - тесты, лекции, обзоры
яндекс.ћетрика
Рейтинг@Mail.ru