Амиды сульфаниловой кислоты и их производные.

Сульфаниламидны препараты (далее сульфаниламиды) являются производными  п-аминобензолсульфамида (амида сульфаниловой кислоты):

Общие формулы сульфаниламидов и их натриевых солей могут быть представлены следующим обра­зом:

Сульфаниламиды отличаются друг от друга по характеру радикалов R и R₁. Большинство их них явля­ются первичными ароматическими аминами (R₁=H). Водород в амидной группе может быть замещен радика­лами (R) алифатической или гетероциклической структуры. Из нескольких десятков применяемых сульфани­ламидов будут рассмотрены только некоторые, наиболее эффективные. Их классификация, химическая струк­тура и описание представлены в таблице.

Амид сульфаниловой кислоты, являющийся родоначальником этой группы лекарственных веществ, был впервые синтезирован в 1908 г. Гельмо. Однако его уникальные лечебные свойства были обнаружены лишь 27 лет спустя. В феврале 1935 г. в печати появилось сообщение венгерского ученого Домагка, которое открыло новую эру в химиотерапии. Домагк исследовал на мышах действие пронтозила, представляющего собой 4-сульфамидо-2,4-диамино-азобензол (красителя, полученного из амида сульфаниловой кислоты):

Эффект был поразительный. Все мыши, получившие предварительно по 10 смертельных доз культуры гемолитического стрептококка, после введения пронтозила остались живы, а все контрольные погибли. Работы Домагка положили начало широким исследованиям в области химиотерапевтического действия производных амида сульфаниловой кислоты. В конце 1935 г. работами супругов Трефуэль в Институте Пастера (Париж) было показано, что действие пронтозила обусловлено наличием в его молекуле амида сульфаниловой кислоты. Эта идея открыла путь для синтеза различных производных амида сульфаниловой кислоты и установления механизма их антибактериального действия.

В 1935 г. О.Ю.Магидсон и М.В.Рубцов (ВНИХФИ), И.Я. Пестовский (Уральский филиал ВНИХФИ) провели систематические исследования сульфаниламидных препаратов. Синтезировано более 80 соединений этого ряда и установлена связь между химической структурой и противомикробным действием. Было показа­но, что химиотерапевтическое действие этой группы соединений является частным случаем активности ве­ществ с общей формулой:

где X — Н, арил, алкил, гетероцикл.

Замена NН₂-группы в положении 4 другим радикалом (-СН₃, -ОН, -С1, -СООН и др.) ведет к полной потере активности. Но активность сохраняется при наличии в положении 4 радикалов — CONH-; R=N-; НО-NH-; (СНз)₂N- и др., которые при гидролизе или других химических превращениях образуют свободную ами­ногруппу. Перемещение амино-группы из положения 4 в положение 2 или 3, а также введение дополнительных радикалов в бензольное ядро приводит к значительному снижению или полной потере активности сульфани­ламидов.

При изучении влияния азогрупп на активность сульфаниламидов (вопреки утверждениям французских исследователей супругов Трефуэль) было доказано, что азогруппа в положении 4 придает этим соединениям более высокий терапевтический эффект по сравнению с аминогруппой. В последующие годы это нашло свое подтверждение в создании сульфаниламидов пролонгированного действия. Было также установлено, что хи­миотерапевтическое действие сульфаниламидов усиливается при введении кислотных остатков в аминогруппу и слабоосновных заместителей в сульфамидную часть молекулы. Замещение водорода в сульфамидной группе позволило получить соединения с пониженной токсичностью и различной степенью активности. Это явилось предпосылкой для синтеза многих производных амида сульфаниловой кислоты.

Проведенные теоретические исследования нашли свое практическое подтверждение. Уже через не­сколько месяцев после публикаций Домагка в нашей стране был разработан промышленный способ получения Стрептоцида, а в последующие годы налажено производство других сульфаниламидов.

По современным представлениям механизм антибактериального действия сульфаниламидов заключает­ся в следующем. Микроорганизмы в своём развитии синтезируют фолиевую кислоту, которая контролирует биосинтез аминокислот, пуриновых и пиримидиновых оснований. В химической структуре нормальной фолиевой кислоты содержится фрагмент п-аминобензойной кислоты. Однако в присутствии сульфаниламидов фермент, осуществляющий биосинтез фолиевой кислоты, вместо п-аминобензойной кислоты использует её имита­тор — антагонист (сульфаниламидный фрагмент). В результате микроорганизм вместо фолиевой (I) синтезиру­ет псевдофолиевую кислоту (II):

Указанные изменения в структуре блокируют образование нормальных метаболитов: дигидро- и тетра-гидрофолиевых кислот. При этом нарушается синтез нуклеиновых кислот и клеточных белков, что и лежит в основе бактерицидного и бактериостатического действия сульфаниламидов. На клетки человека они такого действия не оказывают, т.к. его организм не вырабатывает фолиевую кислоту, а получает её с пищей.

Свойства.

Сульфаниламиды представляют собой белые или белые с желто-ватым оттенком кристаллические веще­ства без запаха. Исключением является салазопиридазин — оранжевого цвета (таблица).

Сульфаниламиды мало растворимы или практически нерастворимы в воде и в таких органических рас­творителях, как этанол, эфир, хлороформ. Сульфаниламид умеренно растворим в этаноле, а салазодин легко растворим в диметилформамиде. В ацетоне некоторые из них растворимы (сульфаниламид).

Натриевые соли сульфаниламидов (сульфацетамид натрия) легко растворимы в воде и метаноле (при комнатной температуре) и практически нерастворимы или мало растворимы в других органических раствори­телях (этаноле, эфире, хлороформе, ацетоне).

Растворимость в кислотах и растворах щелочей обусловлена амфотерными свойствами большинства сульфаниламидов. Они проявляют основные свойства, так как в молекуле имеется ароматическая аминогруппа. Поэтому сульфаниламиды, как правило, могут растворяться в кислотах с образованием солей (сильно гидролизованных в растворах):

В разведенных кислотах при комнатной температуре нерастворимы фталилсульфатиазол и салазодин, в молекулах которых атом водорода первичной аминогруппы замещен ароматическим радикалом.

Кислотные свойства у сульфаниламидов выражены сильнее, чем основные. Они обусловлены наличием в молекуле группы -SO₂-NH-, содержащей подвижный атом водорода. Вследствие этого сульфаниламиды об­разуют с щелочами соли:

Поэтому все они легко растворяются в растворах щелочей.

Синтез сульфаниламидов.

Сульфаниламид (стрептоцид) — структурная основа всех сульфа-ниламидных препаратов. В качестве ис­точников получения сульфа-ниламида используют различные органические соединения с общей формулой

Исходные продукты синтеза должны содержать ацилированную первичную ароматическую аминогруппу. Это позволяет предохранить ее от изменений в процессе синтеза. На последнем этапе синтеза ацилированный амин гидролизуют, получая первичный ароматический амин.

Впервые в нашей стране сульфаниламид был синтезирован О.Ю.Магидсоном и М.В.Рубцовым из ацетанилида. Известны также способы его получения из хлорбензола, форманилида, дифенилмочевины, фенилуретанов. Наиболее рациональным и экономичным является синтез сульфаниламидов из N—карбометоксисульфанилхлорида (фенилуретилансульфохлорида), который получают действием избытка хлорсульфоновой кислоты на N-фенилметилуретан:

При последующем синтезе сульфаниламида (стрептоцида) действуют аммиаком. После этого уретановую группировку подвергают гидролизу:

Примером получения натриевых солей является синтез сульфа-цетамида-натрия, который осуществляют из ацилированного сульфаниламида:

Указанные схемы синтеза дают общее представление о процессах получения сульфаниламидов. Факти­чески они протекают гораздо сложнее, так как сопровождаются образованием различных побочных продуктов. Кроме того, в зависимости от условий синтеза могут получаться таутомеры, так как сульфаниламиды могут существовать в амидо- и имидоформах. Более 60% сульфаниламидов имеют одну или несколько полиморфных модификаций. Например, стрептоцид — четыре, а кроме них моногидрат и два сольвата. Полиморфные формы, сольваты, гидраты образуются и видоизменяются в зависимости от условий кристаллизации, используемых растворителей, при сушке, измельчении и зависят от температурного режима при проведении этих процессов, а также от того, как хранятся сульфаниламиды.

Испытания на подлинность.

Для испытаний подлинности сульфаниламидов используют общие и частные реакции, обусловленные наличием тех или иных функциональных групп в молекулах.

Реакция образования аэокрасителя. Это общая реакция не только на сульфаниламиды, но и на все соединения, содержащие в молекуле незамещенную первичную ароматическую аминогруппу. Сульфани­ламиды, у которых аминогруппа замещена радикалом (фталилсульфатиазол), предварительно гидролизуют кипячением с разведенной хлороводородной кислотой. Реакция основана на образовании хлорида диазония в результате действия раствором нитрита натрия и разведенной хлороводородной кислотой. Последующее соче­тание хлорида диазония в щелочной среде с фенолами приводит к образованию азокрасителя. Известно очень большое число азосоставляющих. ГФ рекомендует для выполнения этой реакции щелочной раствор β-нафтола:

В результате реакции появляется вишнево-красное окрашивание или образуется осадок оранжево-красного цвета. В качестве азосоставляющих может использоваться также α-нафтол (тёмно-фиолетовый азо-краситель), хинозол (оранжевый). Азокрасители образуются также при взаимодействии с солями диазония ароматических аминов, например, N-(1-нафтил)-этилендиамина. В этом случае азосочетание следует выпол­нять в слабокислой среде (в сильнокислой среде реакция не идет). Описаны способы идентификации, основан­ные на использовании роданинов для азосочетания с солями диазония сульфаниламидов (красное окрашива­ние).

Реакции конденсации. Как и производные п-аминобензойной кислоты, сульфаниламиды образуют в щелочной среде продукты конденсации с 2,4-динитрохлорбензолом (желтого цвета) и в кислой среде окрашен­ные продукты конденсации с альдегидами типа шиффовых оснований. В качестве реактивов используют п-диметиламинобензальдегид (желтое или оранжевое окрашивание), ванилин (желтое), формальдегид (желто-оранжевое или розовое), уксуснокислый раствор фурфурола (красное или малиново-красное).

Лигниновая проба. Своеобразной разновидностью реакции образования шиффовых оснований является лигнииовая проба, используемая для экспресс-анализа. Она выполняется на древесине или газетной бумаге, при нанесении на которую сульфаниламида (или другого первичного ароматического амина) и капли разведенной хлороводородной кислоты появляется оранжево-желтое окрашивание. Сущность происходящего химического процесса в том, что из лигнина образуются ароматические альдегиды: я-оксибензальдегид, сиреневый альдегид, ванилин (в зависимости от вида лигнина). Альдегиды взаимодействуют с первичными ароматическими аминами, образуя шиффовы основания:

Реакции галогенирования. Эти реакции основаны на наличии донорной группы в ароматическом ядре молекулы сульфаниламида (заместитель первого рода):

Реакции галогенирования могут быть использованы как для качественного анализа (образование осадков дибром- или дииодпроизводных), так и для количественного (броматометрического, иодометрического, иод-хлорометрического) определения сульфаниламидов.

Реакция обнаружения серы. Наличие серы в молекуле сульфаниламидов, как и в других содержа­щих серу соединениях, можно установить после окисления органической части молекулы концентрированной азотной кислотой или сплавления с 10-кратным количеством нитрата калия до сульфат-иона. Последний затем обнаруживают с помощью раствора хлорида бария.

Пиролиз сульфаниламидов. При термическом разложении сульфаниламидов в сухой пробирке пла­вы приобретают различную окраску. Одновременно образуются газообразные продукты. Эта реакция позволя­ет отличать некоторые сульфаниламиды друг от друга. Так, при пиролизе сульфаниламида (стрептоцида) обра­зуется плав фиолетового цвета и появляется запах аммиака и анилина.

Реакция с растворами солей тяжелых металлов. Ряд ионов тяжелых металлов (меди, ко­бальта, железа, серебра и др.), замещая подвижный атом водорода сульфамидной группы, образуют с сульфа­ниламидами внутрикомплексные соединения. Нерастворимые комплексы меди (II) и кобальта (II) имеют раз­личную окраску. Реакции следует выполнять в нейтральной среде, чтобы не допустить образования осадков гидроксидов указанных катионов.

Некоторые из этих цветных реакций могут быть использованы для отличия сульфаниламидов друг от друга. ФС рекомендует использовать реакцию с раствором хлорида кобальта при испытании на подлинность сульфадиметоксина. Образуется ярко-розовый с лиловым оттенком аморфный осадок. Сульфаниламид в этих условиях образует голубоватый с синеватым оттенком осадок, а сульфален приобретает голубое окрашивание.

Раствор сульфата меди образует с сульфаниламидом (стрептоцидом) зеленоватый с голубым оттенком осадок, с сульфацетамидом натрия — голубовато-зелёный осадок (не изменяющийся при стоянии), с сульфадиметоксином, сульфаленом и салазодином — зелёного цвета осадки.

Были исследованы методом УФ-спектрофотометрии оптические характеристики продуктов взаимодей­ствия некоторых сульфаниламидов с сульфатом меди (1) в присутствии гидроксиламина (Угрюмова Т. А.). Ус­тановлено, в частности, что сульфадиметоксин и салазодин имеют по три максимума поглощения (при 210, 245, 327 нм и 211, 255, 360 нм соответственно). Эти константы предлагаются для идентификации указанных лекарственных веществ. Анализ УФ-спектров поглощения образующихся окрашенных соединений позволил отнести происходящие взаимодействия к реакциям комплексообразования и предположить их химизм, в част­ности, для сульфадиметоксина:

Разработаны условия использования этой реакции для фотометрического определения, а также приме нения сульфата меди (И) в присутствии гидроксиламина гидрохлорида для титриметрического определения, в т.ч. в присутствии продуктов гидролиза сульфаниламидов.

Реакция с нитропруссидом натрия. Растворы сульфаниламидов в присутствии едких щелочей при добавлении 1%-ного раствора нитропруссида натрия и последующего подкисления минеральной кислотой образуют окрашенные в красный или красно-коричневый цвет раствор или осадок). Если заменить минеральную кислоту ледяной уксусной, то сульфадиметоксин образует телесного цвета, а сульфален — тёмно-бежевый раствор.

Реакции окисления. Сульфаниламиды, как и другие ароматические амины, довольно легко окисляются. Установлено, что при этом образуются окрашенные соединения хиноидной структуры типа индофенолов. Это используется для идентификации сульфаниламидов. После их извлечения кипящей водой добавляют 3%-ный раствор пероксида водорода и 5%-ный раствор хлорида железа (III). Сульфаниламид в этих условия; приобретает коричнево-красное окрашивание, а затем выпадает осадок желто-бурого цвета. Другие сульфаниламиды также образуют окрашенные растворы и осадки. Если использовать в качестве окислителя хлорамин то в щелочной среде при сочетании с фенолом образуются индофеноловые красители. Сульфаниламид, в частности, образует краситель синего цвета.

Частные реакции на сульфаниламиды. К числу таких реакций следует отнести обнаружение (по запаху) уксусной кислоты при кислотном гидролизе сульфацетамида натрия; выделение при гидролизе фталилсульфатиазола фталевой кислоты, которую затем идентифицируют по реакции образования флуоресцеина. Для отличия натриевых солей от соответствующих сульфаниламидов выполняют реакцию на ион натрия (окраска бесцветного пламени горелки в желтый цвет).

Сульфацетамид натрия при действии уксусной кислотой выделяет белый осадок сульфацетамида, который после высушивания должен иметь температуру плавления около 183 °C:

При растворении осадка в этаноле и добавлении концентрированной серной кислоты образуется этил-ацетат, имеющий характерный запах:

Фталилсульфатиазол при сплавлении с резорцином и каплей концентрированной серной кислоты при­обретает оранжево-красное окрашивание. После охлаждения и добавления 2 мл раствора гидроксида натрия отбирают 1 каплю полученной смеси и прибавляют к 200 мл воды. Появляется желтая окраска с интенсивной зеленой флуоресценцией.

Наличие азогруппы в молекуле салазодина подтверждают реакцией гидрирования. Для этого к раствору салазодина прибавляют цинковую пыль и концентрированную хлороводородную кислоту. Окраска раствора постепенно обесцвечивается.

Испытания на чистоту.

В сульфаниламидах определяют отсутствие или предельное содержание допустимых количеств органи­ческих примесей, сульфатов, хлоридов, сульфатной золы и тяжелых металлов, контролируют рН среды (ки­слотность или щелочность), прозрачность, цветность растворов. Гидраты (сульфацетамид натрия), сульфани­ламид, фталилсульфатиазол и салазодин подвергают проверке на потерю в массе при высушивании. Некоторые сульфаниламиды контролируют на содержание исходных продуктов синтеза. Так, по ФС во фталилсульфатиазоле определяют содержание примеси фталевой кислоты и норсульфазола. Определение этих примесей осуще­ствляют титриметрическими методами. Фталевую кислоту титруют 0,1 М раствором гидроксида натрия в вод­ном извлечении. Примесь норсульфазола (не более 0,5%) определяют нитритометрическим методом.

Для испытания на посторонние органические примеси в сульфалене и сульфадиметоксине используют ТСХ на пластинках Силуфол или Армсорб УФ-254. После хроматографирования в условиях, приведенных в ФС, должно просматриваться только одно пятно, соответствующее стандартному образцу свидетеля. Этот же метод применяют для установления степени чистоты салазодина и определения в нем допустимых количеств примесей салициловой кислоты (2%) и сульфапиридазина (0,5%). Содержание примесей определяют по вели­чине и интенсивности пятен соответствующих свидетелей, нанесенных на ту же пластинку. Аналогичным ме­тодом устанавливают наличие посторонних примесей в сульфаниламиде и сульфацетамиде натрия. Устанавли­вают также микробиологическую чистоту сульфаниламидов (ГФ XI, в. 2, с. 193).

Общие методы количественного определения.

Нитритометрия. Этот метод рекомендован НД для количественного определения сульфаниламидов, являющихся первичными ароматическими аминами. Определение основано на способности первичных арома­тических аминов образовывать в кислой среде диазосоединения:

ФС рекомендует нитритометрию для количественного определения сульфаниламида, сульфацетамида натрия, сульфадиметоксина, сульфалена.

В качестве титранта используют нитрит натрия (0,1 М раствор). Титруют в присутствии бромида калия при 18-20°С или при 0-10°С. Бромид калия катализирует процесс диазотирования, а охлаждение реакционной смеси позволяет избежать потерь азотистой кислоты и предотвратить разложение соли диазония. Точку экви­валентности можно установить одним из трех способов: с помощью внутренних индикаторов (тропеолин 00, нейтральный красный, смесь тропеолина 00 с метиленовым синим); внешних индикаторов (иодкрахмальная бумага) или потенциометрически.

Нейтрализация. Этот метод может быть применен для количественного определения сульфанилами­дов и их солей. Он основан на способности сульфаниламидов образовывать с щелочами соли:

Поскольку образующаяся натриевая соль легко подвергается гидролизу, то результаты определения по­лучаются заниженные. Поэтому чрезвычайно важен выбор оптимального растворителя, который следует осу­ществлять с учетом констант диссоциации сульфаниламидов. Сульфаниламиды с константой диссоциации 10^-7 – 10^-8 можно титровать в водно-ацетоновом растворе или в этаноле (индикатор тимолфталеин),а с константой диссоциации 10^-9 титруют только в неводных растворителях. Метод неводного титрования в среде диметилформамида ФС рекомендуют для определения фталилсульфатиазола и салазодина, имеющих очень слабо вы­раженные кислотные свойства. Титрантом служит раствор щелочи в смеси метанола и бензола (индикатор ти­моловый синий). Фталилсульфатиазол в неводной среде титруется 0,1 М раствором гидроксида натрия как двухосновная кислота:

Натриевые соли сульфаниламидов можно титровать кислотой в спирто-ацетоновой среде (индикатор метиловый оранжевый):

Куприметрия. В основе метода лежит реакция взаимодействия сульфаниламидов с ионом меди (II). В качестве титранта используют 0,01-0,1 М раствор сульфата меди (II). Титруют в фосфатной или боратной бу­ферной системе с визуальной фиксацией эквивалентной точки (Т. А. Кобелева).

Броматометрия. Метод основан на реакции галогенирования сульфаниламидов. Титруют раствором бромата калия в кислой среде в присутствии бромида калия. Конечную точку устанавливают при прямом тит­ровании по обесцвечиванию (бромом) индикатора метилового оранжевого, а при обратном титровании иодо-метрически:

Окисление и определение по сульфат-иону. Иодхлорометрия, как и броматометрия, метод основан на реакции галогенирования. Иодирование осуществляют с помощью титрованного раствора иодмонохлорида. Избыток последнего устанавливают иодометрически:

количественного определения используют реакцию минерализации сульфаниламидов при осторожном нагревании с не содержащим примеси сульфатов 30%-ным раствором пероксида водорода в присутствии следов хлорида железа (III). В результате получается светлая совершенно прозрачная жидкость, содержащая эквивалентное сульфаниламиду количество сульфат-ионов. Последние определяют либо гравиметрическим, либо титриметрическим методом, используя и в том, и в другом случае раствор хлорида бария.

В ФС включены способы идентификации сульфаниламидов по УФ-спектрам поглощения. Выбор этих методик основан на проведении предварительных исследований. В.Е. Чичиро, А.П. Арзамасцевым с сотрудни­ками унифицированы условия получения УФ-спектров 14 сульфаниламидов для их идентификации. Раствори­телями служили 0,1 М растворы гидроксида натрия и хлороводородной кислоты. УФ-спектры были сняты в области 210-360 нм. Установлено, что идентифицировать тот или иной сульфаниламид можно по форме УФ-спектра, удельному показателю поглощения или на основании вторых производных УФ-спектров.

Для испытания подлинности сульфаниламида ФС рекомендует измерять УФ-спектр 0,0008%-ного рас­твора в 0,01 М растворе гидроксида натрия. Он должен иметь максимум поглощения при 251 нм. УФ-спектр 0,015%-ного раствора сульфаниламида в 1 М растворе хлороводородной кислоты характеризуется наличием максимумов поглощения при 264 и 271 нм, минимумов поглощения при 241, 268 нм и плеча от 257 до 261 нм. УФ-спектр 0,001%-ного раствора сульфацетамида натрия имеет максимум поглощения при 256 нм и минимум — при 227 нм, а сульфален имеет два максимума поглощения — при 250 и 318 нм (растворитель 0,1 М раствор гидроксида натрия). Характерные особенности имеют УФ-спектры растворов других сульфаниламидов. Они широко применяются для идентификации и количественного спектрофотометрического определения сульфа­ниламидов с использованием таких растворителей, как вода, 0,01 М и 0,002 М растворы гидроксида натрия, 0,1 М раствор хлороводородной кислоты и др. Например, в водных растворах определяют при 258 нм сульфани­ламид и сульфацетамид натрия, а сульфадиметоксин спектрофотометрируют при длине волны 270 нм (растворитель 0,002 М раствор гидроксида натрия).

Для сульфалена и сульфадиметоксина ФС рекомендован способ измерения УФ-спектров поглощения щелочных растворов по сравнению с кислыми растворами той же концентрации. Такой дифференциальный УФ-спектр у сульфалена имеет один максимум поглощения при 325 нм, а у сульфадиметоксина — один мини­мум поглощения при 260 нм и два максимума при 253 и 268 нм. Одновременно измеряют дифференциальные УФ-спектры кислых растворов сульфалена и сульфадиметоксина относительно щелочных. Они имеют по од­ному максимуму поглощения: при 289 нм — у сульфалена, при 288 нм — у сульфадиметоксина.

Характерные спектры, обусловленные наличием в молекуле азогруппы, имеют в видимой области спек­тра (400-600 нм) азопроизводные сульфаниламидов. Их используют для идентификации и количественной оценки. Так, салазодин идентифицируют по наличию максимума поглощения в области 457 нм (растворитель 0,1 М раствор гидроксида натрия).

Известны многочисленные методики фотоколориметрического определения сульфаниламидов, в т.ч. в крови и моче, основанные на цветных реакциях образования азокрасителей с использованием таких азосостав-ляющих, как хинозол, резорцин, продуктов диазотирования с роданинами, а также индофенольной реакции (с хлораминами, гипохлоритом натрия) и др. Для фотометрического титрования сульфаниламидов использованы сульфат меди (II) и вольфрамат натрия.

Для испытания на подлинность сульфаниламида и фталилсульфатиазола применяют ИК-спектроскопию в области 4000-400 см~’. Идентифицируют по наличию характеристических полос поглощения ИК-спектров, которые должны совпадать с прилагаемыми к ФС рисунками ИК-спектров.

Для идентификации и количественного определения сульфаниламидов может быть использован один из наиболее информативных методов — спектроскопия ПМР. Оптимальным для получения ПМР-спектров явля­ется 5%-ный раствор NaOD в D₂O. Для всех сульфаниламидов являются характеристическими дублеты прото­нов бензольного цикла (n-аминобензолсульфониламидной группы) в области 6,7-8,2 м.д с суммарной интен­сивностью 4 Н. В фармацевтическом анализе используют характеристические дублеты протонов бензольного цикла для алифатических (R) производных, а сигналы поглощения протонов гетероциклов и их заместителей — для сульфаниламидов, имеющих гетероциклическую и ароматическую структуру.

Для обнаружения и количественного определения сульфаниламидов, в т.ч. в биологических жидкостях, применяют метод ТСХ и метод ВЭЖХ с использованием подвижной фазы, состоящей из воды, метанола и фосфатного буферного раствора (рН 4,9).

Известен потенциометрический метод определения сульфаниламидов, имеющих в молекуле первичную ароматическую аминогруппу. Титрантом служит 0,1 М раствор сульфата церия (IV) в присутствии серной ки­слоты (рН 1,5). Эквивалентный объем титранта находят графически по способу тангенсов, титруют с кало­мельным и платиновым электродами. Сульфаниламиды можно обнаружить при помощи электрофореза на бу­маге по их относительной электрофоретической активности.

Количественное определение сульфаниламидов, являющихся азосоединениями (салазодин), можно вы­полнять полярографическим методом. Полярографируют раствор в диметилформамиде, снимая полярограмму в токе азота в интервале 0,2-0,4 В относительно насыщенного каломельного электрода. Расчет ведут по калиб­ровочному графику.

Хранение и применение

Подлинность подтверждают также методом ТСХ на пластинках Кизельгель при хроматографировании в подвижной фазе состава: хлороформ-метанол-раствор аммиака концентрированный (80:20:3). После проявле­ния реактивом Драгендорфа должны обнаруживаться два основных пятна на уровне стандартных образцов ве­ществ-свидетелей триметоприма и сульфаметоксазола. Этим же методом обнаруживают в таблетках наличие посторонних примесей (не более 1%), сульфаниламида (стрептоцида) и кислоты сульфаниловой (не более 0,5% и 0,3% соответственно).

Количественное определение (по ФС) выполняют раздельно на каждый из компонентов. Сульфаметок­сазол определяют нитритометрическим методом. Точку эквивалентности устанавливают потенциометрически или с помощью иодкрахмальной бумаги. Содержание триметоприма определяют методом неводного титрова­ния в смеси ледяной уксусной кислоты и уксусного ангидрида (30:10). Титруют 0,1 М раствором хлорной ки­слоты (индикатор кристаллический фиолетовый).

Хранят Ко-тримоксазол, как и другие сульфаниламиды по списку Б, в прохладном, сухом, защищённом от света месте.

Сочетание сульфаметоксазола и триметоприма в одном лекарственном препарате обеспечивает его вы­сокую бактериостатическую активность, в том числе в отношении бактерий, устойчивых к другим сульфани­ламидам. Назначают Ко-тримоксазол при инфекциях дыхательных, мочевыводящих путей, желудочно-кишечного тракта, кожи и др. Выпускают в таблетках по 0,12 и 0,48 г и в виде суспензии (сиропа).

Аналогичным по фармакологическому действию является отечественный сульфатен (Sulfatonum). Выпускают его в виде таблеток, содержащих 0,25 г сульфамонометоксина и 0,1 г триметоприма.