Культивирование вирусов. Методы

Культивирование вирусов. Методы

Вирусы – мельчайшие микроорганизмы, не имеющие клеточного строения, белоксинтезирующей системы, содержащие только один тип нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК).

Культивирование вирусов осуществляют с помощью методов:

  • культивирование вирусов в организме экспериментальных животных,
  • культивирование вирусов в развивающихся куриных вибрионах
  • культивирование вирусов в культурах тканей (чаще – эмбриональные ткани или опухолевые клетки).

Культивирование вирусов в организме экспериментальных животных
Исследуемый материал вводят в организм хозяина для выявлений общих реакций организма, свидетельствующих о развитии инфекции: появление симптомов заболевания, гибель животного или какие-либо иные специфические реакции, например образование антител.

Культивирование вирусов в развивающихся куриных вибрионах
Культивирование вирусов можно проводить на куриных эмбрионах, заражая их в амниотическую полость, желточный мешок, на хорион-аллантоисную оболочку или непосредственно в сам эмбрион. Амниотическую и аллантоисную жидкость отсасывают шприцем, оболочки и эмбрион извлекают в стерильные чашки Петри.

Показателем накопления служат образование бляшек (беловатых выпуклых пятнах) на хорион-аллантоисной оболочке, реакция гемагглютинации куриных или других эритроцитов аллантоисной и/или амниотической жидкости зараженных эмбрионов. Реакция основана на способности гемагглютинирующих вирусов склеивать эритроциты определенных видов животных, птиц или человека.

Культивирование вирусов в культурах тканей
Является одним из основных методов выделения и изучения вирусов. Преимущество метода культивирования вирусов в культуре клеток состоит в том, что почти к каждому вирусу можно подобрать чувствительные клетки или ткани, создать стандартные условия (наличие клеток одного типа).

Для приготовления культур клеток чаще всего используются эмбриональные ткани и клетки злокачественных образований, отличающиеся более активной способностью к размножению. Применяются и нормальные ткани человека, обезьян и некоторых других видов животных.

В зависимости от методики первичной эксплантации ткани и техники культивирования различают несколько типов.

Культур клеток и тканей:

1. Культуры переживающих эксплантатов тканей.

2. Культуры растущих тканей:

  • культуры фиксированных кусочков ткани;
  • однослойные культуры клеток:

     

    • а) первично-трипсинизированные (однократно культивируемые);      
    • б) перевиваемые клеточные культуры;
    • в) полуперевиваемые культуры клеток (штаммы диплоидных клеток человека и животных).

3. Суспензионные культуры растущих клеток.

 

В зависимости от свойств вируса и типа зараженных им клеток исходом взаимодействия вируса с клеткой могут быть следующие изменения культур клеток:

1. Цитопатическое действие — развитие дегенеративных процессов в клетках. Эти изменения связаны с нарушением метаболизма в клетках и являются строго специфическими для проявления жизнедеятельности каждого вида вируса, отличающимися характером изменений.

2. Образование симпластов — гигантских многоядерных клеток в результате слияния цитоплазмы нескольких клеток и амитотического деления.

3. Образование включений — одно из проявлений ЦПЭ. Включения могут формироваться как в цитоплазме, так и в ядрах клеток.

При размножении вирусов в культуре клеток последние приобретают способность адсорбировать па себе эритроциты (реакция гемадсорбции) при слабовыраженном или отсутствующем ЦПЭ, а также в ранние сроки размножения вирусов в клетках до возникновения ЦПЭ.

4. Увеличение массы вирусов — образование бляшек или колоний вирусов обнаруживается па однослойных клеточных культурах при использовании так называемого агарового покрытия.

«Цветная» реакция основана на разнице в цвете индикатора питательной среды, используемой для культур клеток.

Категории
Рекомендации
Подсказка
Нажмите Ctrl + F, чтобы найти фразу в тексте
Помощь проекту
А знаете ли вы, что нажав сочетание клавиш Ctrl+F - можно воспользоваться поиском по сайту?
X
Copyrights © 2015: FARMF.RU - тесты, лекции, обзоры
Яндекс.Метрика
Рейтинг@Mail.ru